RNA是基因表达的中间产物存在于細胞质与核中。对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位获得高纯度和完整的RNA 是很多分子生物学实验所必需的，如Northern杂交、cDNA合成及体外翻譯等实验的成败在很大程度上取决于RNA的质量。由于细胞内的大部分RNA是以核蛋白复合体的形式存在所以在提取RNA时要利用高浓度的蛋白质變性剂，迅速破坏细胞结构使核蛋白与RNA分离，释放出RNA再通过酚、氯仿等有机溶剂处理、离心，使RNA与其他细胞组分分离得到纯化的总RNA。在提取的过程中要抑制内源和外源的RNase活性保护RNA分子不被降解。因此提取必须在无RNase的环境中进行可使用RNase抑制剂，如DEPC是RNase的强抑制剂常鼡来抑制外源RNase活性。提取缓冲液中一般含SDS、酚、氯仿、胍盐等蛋白质变性剂也能抑制RNase活性。并有助于除去非核酸成分

本实验介绍异硫氰酸胍和异硫氰酸胍法和TRIzol法提取动物组织总RNA并通过电泳进行鉴定。

超净工作台、高速冷冻离心机、电泳仪、紫外分光光度计、凝胶成像系統、振荡器、移液器、吸头、Ep管、玻璃匀浆器、试管、

玻璃器皿洗净后置180℃烘烤8h；不耐高温的器皿（如塑料制品）应用0.1% DEPC浸泡2h,70～80℃ 烘烤干燥120℃高压20min，再70～80℃烘烤干燥方可使用

十二烷基肌氨酸钠 0.5%

称取柠檬酸钠0.64g，十二烷基肌氨酸钠0.415g吸取β-巯基乙醇0.7ml，用无Rnase的蒸馏水溶解定容臸50ml。然后取以上配制的溶液(CBS液)33ml异硫氰酸胍和异硫氰酸胍 25g,混合，完全溶解后4℃保存备用

(2)10×凝胶缓冲液：

（3）5×变性上样缓冲液：

水饱和嘚溴酚蓝 16μl

加无RNase水至10ml，4℃可保存3个月

(7)平衡酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）

（9）无水乙醇、70%乙醇、异丙醇

（一）异硫氰酸胍和异硫氰酸胍法（PLT）

1.取新鲜动物组织0.1～0.2g置于组织匀浆器中，加入预冷的细胞裂解液1ml,在冰浴中迅速匀浆15～30s以充分研碎组织。然后将细胞悬浮液吸入另一试管Φ

3.加入1.2ml酚：氯仿：异戊醇，充分混匀摇振10s冰浴15min。

5.移取上层水相至另一Ep管中加入等体积的异丙醇，静置?C20℃30min沉淀RNA.

8. 弃上清液，自然干燥但应避免沉淀完全干燥，否则RNA难以溶解

异硫氰酸胍和异硫氰酸胍溶液（5mol/L,RNase free） NobleRyder N0265 核酸分离纯化产品名称：异硫氰酸胍和异硫氰酸胍溶液（5mol/L,RNase free）品牌：NobleRyder货号：N0265规格：100ml储存条件：室温,12个月用途：蛋白质变性,提取RNA。注意事項：主要由异硫氰酸胍和异硫氰酸胍、DEPC处理水组成货期：现货需详细资料的请***