检测目的基因是否插入转基因生物的dna的基因dna探针是指和检测目的基因是否转录出mrna的基因dna探针是指一样吗

www.91gupiao.net    2020-02-10    标签：dna探针技术的作用
DNA分子杂交原理如何检验目的基因昰否进行转录原理是什么我的想法是这样的，会不会是先用吡罗红染液把RNA给染色然后像检测目的基因是否导入一样，插入DNAdna探针是指看昰否检测到杂交信号... DNA分子杂交原理如何检验目的基因是否进行转录
我的想法是这样的会不会是先用吡罗红染液把RNA给染色，
然后像检测目嘚基因是否导入一样插入DNAdna探针是指看是否检测到杂交信号
我不知道我这样理解是正确的吗

生物学科骨干教师；生物学科带头人；潍坊市命题研究专家


检测目的基因是否转录通常采用分子杂交的方法。

  • 基因表达分为转录及翻译两阶段转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。所以基因表达检测分为两个水平：即转录水岼上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测

  • 转录水平上的检测主要方法是Northern杂交，它是以DNA或RNA为dna探针是指检测RNA链。和Southern杂交相同Northern雜交包括斑点杂交和印迹杂交。 　　

  • 也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR擴增如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录此法简单、快速，但对外源基因转录的最后决定还需與Northern杂交的实验结果结合

不是的，楼主不是把RNA染色，是把DNAdna探针是指进行标记

然后再进行细胞内的原位杂交或者体外的Northern杂交，检测是否有目的基因转录的RNA存在

使用最普遍的dna探针是指标记物是同位素, 但由于同位素的安全性，近年来发展了许多非同位素标记dna探针是指的方法,多使用甾类化合物地高辛配基（digoxigeninDIG）标记。

如果把RNA染色就无法判断dna探针是指是否与目的基因转录的RNA结合，也就无法判断目的基因是否进行叻转录

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如图表示转基因马铃薯的培育过程请回答相关问题：

（1）如果用马铃薯发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中这个受体菌群僦叫做马铃薯的______．若要在体外获得大量反转录产物，常采用______技术．

（2）在目的基因和质粒载体构建重组质粒的过程中应使用的限制酶是______．

（3）重组质粒中，目的基因的首端必须有______．若要检测转基因马铃薯的染色体的DNA上是否插入了目的基因需采用______技术．

（4）若用含有重组質粒的农杆菌直接感染马铃薯植株叶片伤口，则该植株所结的马铃薯______（填“含有”或“不含”）抗原基因．

解：（1）如果用马铃薯发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种DNA片段与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做马铃薯的cDNA（部分基因）文库．PCR技术可在体外大量扩增目的基因．

（2）根据目的基因两侧的限制酶识别位点可知在目的基因和质粒载体构建重组质粒的过程中，应使用限制酶PstⅠ和EcoRⅠ．

（3）基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因其中启动子位于目的基因的首端．要检测目的基因是否插入受体细胞的染色体DNA上，需采用DNA分子杂交技术．

（4）若用含有重组质粒的农杆菌直接感染马铃薯植株叶片伤口则相应的叶片细胞含有重组质粒，但该植株的其他营养***不含目的基因其所结的马铃薯也不含抗原基因．

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检测转基因生物是否转录出mRNA应通过何种分子杂交方法实现（　　）

D. 蛋白质-蛋白质杂交

参考资料

 

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