中南大学 博士学位论文 Hedgehog通路SMO抗体的制备及其对雄激素非依赖性前列腺癌作 用的研究 姓名：王建松 申请学位级别：博士 专业：外科学（泌尿外科学） 指导教师：齐范 博士学位论文 中文摘要 摘要 背景： 前列腺癌是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一。早期局限 性前列腺癌可行根治性手术或放疗，治愈率高。然而对于转移性前列 腺癌，内分泌治疗虽然初期有一定作用，可是，几乎所有病变会最终 发展为激素非依赖性前列腺癌，尚无有效的治疗方法。近期，以多西 紫杉醇为基础的化疗方案经临床试验证明可以提高激素非依赖性前 列腺癌患者的生存率，改善生活质量。不过，副作用较大，且药物作 用有限，需要寻找新型的治疗激素非依赖性前列腺癌的策略和药物。 生长发育和***形成。该通路同样在前列腺的发育中起作用，而且， 有证据显示，前列腺癌可表达该通路的靶基因PTCHl和GLll；在体 外细胞实验及体内动物实验中发现，该通路抑制剂环耙明能抑制前列 腺癌肿瘤生长、改变侵袭能力，表明该通路不适当的激活与前列腺癌 的发生、进展、转移密切相关。然而，Hh通路在前列腺癌中的作用 方式不能明确，存在自分泌和旁分泌之争。此外，有关研究也提示了 环耙明作用特异性的可疑，表明环耙明对前列腺癌细胞的抑制可能是 不依赖Hh通路的，具有脱靶效应。 和化学合成的小分子药物相比，抗体对相应抗原具有高特异性和 高亲和力的靶向结合能力。SMO蛋白是Hh信号通路中关键的受体蛋 白。本实验拟制备出抗SMO抗体，将其应用于激素非依赖性前列腺 癌细胞DUl45，观察其变化，一方面为自分泌或旁分泌方式提供证 博士学位论文 中文摘要 据，另一方面，判断该抗体能否应用于激素非依赖性前列腺癌的治疗。 方法和结果： 首先，对SMO蛋白进行抗原表位预测，然后合成多肽，与钥孔 血蓝蛋白偶联后对新西兰兔进行免疫。第四次免疫后取血清，ELISA blot免疫印迹检测，结果显示，抗血清可特异性结合DUl45细胞中 SMO蛋白，表明成功制备了抗SMO多克隆抗体。 其次，用MTT实验判断抗SMO抗体对DUl45细胞增殖的影响， 用流式细胞仪观察其诱导DUl45凋亡情况，用小室试验检测抗体对 时设置空白对照和正常兔IgG对照。结果表明，在DUl45细胞存在 自分泌的Hh信号通路，抗SMO抗体可特异性地阻断Hh信号通路， 抑制DUl45细胞的增殖，并诱导其凋亡，降低侵袭力。 最后，联合应用抗SMO抗体和多西紫杉醇于DUl45细胞，并使 用同样的实验技术路线。结果表明，二药联用具有协同作用，较单药 应用效应更强，包括对DUl45细胞的抑制增殖能力，诱导凋亡以及 降低侵袭力等方面。 结论： 在激素非依赖性前列腺癌存在自分泌方式的Hh信号通路。抗 SMO抗体可单独应用或与多西紫杉醇联合应用治疗激素非依赖性前 列腺癌。 U 博士学位论文 中文摘要 关键词： 激素非依赖性前列腺癌，Hh信号通路，DUl45细胞，SMO 蛋白，多肽抗体，多西紫杉醇 ⅡI 博士学位论文 英文摘要 Abstract Background： Prostatecanceris the